实验室里塞满了玻璃瓶和旋转的离心机，空气中弥漫着乙醇挥发的刺鼻味。别再拿那种背诵式的好书了，直接看它是如何把 RNA 从细胞这团乱麻里拽出来的。我们拿的这管 Trizol，本质上是个“细胞粉碎机”，它最了得的地方在于能把死细胞和活细胞里的东西全拉出来，不管它们长啥样。 拿几片细胞过来，直接扔进液氮罐里冻住。
这一步看似好办，实际上是为了让细胞彻底失活，防止 RNA 在取过程中被酶吃掉。
这时候细胞已经“罢工”了，不再进行任何生物反应。
接着，切块要么研磨，把细胞壁层层剥开，就像把洋葱剥皮一样。
这一步最关键的是要静置 30 分钟到 1 小时，让细胞里的核孔蛋白把 RNA 给“挤”出来。
要是你跳步了，要么挤得忒狠细胞死了，出来的 RNA 活性就是零。 这时候你会拿到一个浑浊的液状物，里面混着蛋白质、脂质，就连还有那些死活细胞碎片。
这时候你就要启动“洗屁股”了，也就是去污。加等量的异丙醇，摇匀，离心，弃上清。
这一步是为了把那些不溶于乙醚的大分子脂肪跟 RNA 分离开。
要是你这时候去测纯度，那个 A260/A280 的比值要是小于 1.8，说明脂类没洗干净利落，后续测出来的 Everything 全错了，那是大忌。 洗完脂类之后，真正的难题来了，就是要把那些残留的蛋白质和细胞残留物给踢出去。
这时候加入酚 - 氯仿，摇匀，离心。
这个步骤实际上分两步走，先离心去浮蛋白，再抽提 RNA。但大量人第二遍抽提黄了，不是机器坏了，而是没加完所有的酚，要么酚的浓度不对。
这时候你会看到两相：上层是含酚的有机相，下层是无酚的水相，中间的界面层有时候是浑浊的。
这时候你只需求小心地把水相转到一个干净利落的离心管里。 这时候你会看到液面分层，中间有个分界线。
这是 Trizol 取成功的标志，也是 RNA 质量的金标准。
这时候你要是再测一次 A260/A280，理想状态是 2.0 到 2.1。低于 1.7 说明 RNA 还没洗干净利落，有蛋白没除干净利落；高于 2.2 说明脂类没除干净利落，还是混在 RNA 里。
这时候你可能会问，那取效率呢？单独测一下纯度凑合，但总 RNA 回收率呢？这就得依赖流式细胞仪了。把细胞悬液直接溶血，跑个流式，看那个荧光通道。
要是回收率只有 80%，那你的实验数据绝对推不出来。
这时候你要知道，有时候不是操作错了，就是细胞密度不够，要么有些细胞死活混杂，害得计数不准。 最终一步，就是加乙醇。加到 80% 左右，再加到 100% 的绝对乙醇。
这时候细胞会裂解，那些残留的细胞器直接崩碎。离心，弃去上清。
这时候你拿到的就是最终的纯 RNA 水溶液，颜色是清亮的，像水一样透明。
这时候你就能够启动做逆转录，看看 PCR 能不能扩增出基因了。 整个过程大约只需求 20 分钟，要是你手快，就连能在 10 分钟内做完。但要注意，乙醇的浓度务必严格管住。加得忒少，RNA 会沉淀在管底；加得忒狠，细胞膜会崩裂。
另外，两种酚的混合顺序挺关键，先加酚，再加氯仿，摇匀再离心，这个顺序不能乱。
要是你把氯仿加到酚里，要么颠倒过来，相界面就会变得不清楚，这时候你再去抽提 RNA，成功率就大打折扣。 有时候你会遇到 RNA 降解的情况。
这时候你会看到 RNA 条带在电泳上断得更了得，要么 A260/A280 比值升高。别慌，这可能是核酸酶污染了，要么取过程工夫忒短。
这时候你能够通过加 RNase 抑制剂，要么延长透析工夫来解决。
记住，取 RNA 不是为了把它拿出来当成废纸扔进下水道，而是为了用它来证明你的假设。
要是你连个条带都跑不出来，你的论文就写不出来了。
故此，做好每一个步骤，特别是那个关键的酚氯仿分离，比啥都关键。
